细胞凋亡是一种自主且有序的死亡，是一种生理性的主动过程。凋亡异常通常会导致癌症、自身免疫性疾病或退化性疾病，因此细胞凋亡检测也成为了热门，接下来对凋亡检测试剂盒的常见问题进行汇总，供大家参考。

第一部分 AnnexinV/PI检测

Q1:Annexin V/ PI 试剂盒能否检测除人以外其他动物细胞凋亡情况？

可以，因为Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合，而PS不存在种属间差异。

Q2:使用Annexin V/ PI 试剂盒进行凋亡检测，用含EDTA 的胰酶消化细胞对结果有影响吗？

会，因为Annexin V 是Ca2+依赖的蛋白，EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V与PS 的结合，进而影响实验结果。

Q3:如果细胞自带GFP蛋白，请问哪种凋亡检测试剂盒适用该细胞的凋亡检测？

选用PE标记或者APC标记的Annexin V凋亡检测试剂。

Q4:对于来自血液的细胞样品，为什么去除血液中的血小板？

因为血小板中含有PS，其能与Annexin V结合进而干扰实验结果。

Q5:Annexin -V 在实验操作上应注意哪些事项？

由于Annexin -V染料上带有荧光基团，在实验操作上应尽量避光操作和孵育；为保证实验结果的正确性应在染色后1h内上机检测。

第二部分 TUNEL检测

Q1:组织切片厚度多少比较合适？

组织切片过厚，会使得固定效果不理想，最好控制在10 μm以内。

Q2:除了多聚甲醛固定，可不可以使用甲醇固定？

使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。酸性固定液，也容易导致假阳性的出现。建议采用新鲜配置的4%中性多聚甲醛固定液。

Q3:如何避免出现非特异性荧光标记？

1）对于本身核酶或聚合酶活性水平较高的组织/细胞，例如平滑肌细胞，建议取细胞或组织后立即固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。

2）在进行末端标记的时候，保证细胞或组织表面保持湿润，检测反应液能很好地覆盖样品。

Q4:Tunel检测在实验操作上有哪些注意事项？

荧光基团长期暴露在普通光照下，会发生严重淬灭，因此在实验操作上应尽量避光操作和孵育。

附 荧光补偿的调节

Q1:光补偿调节的原则？

1）用于调节补偿的样本必须单染。
2）用来调节补偿的荧光素必须与实验用的荧光素一样（例如不能用FITC调节EGFP的补偿）。
3）横平竖直：理论上X-Mean或者Y-Mean要相等（如下图所示），但在实际操作中，只需要保证单染的细胞不跨区存在。

 

Q2:如何进行光补偿的调节？

进行荧光补偿的调节，需要设置几组对照实验。以AnnxinV-FITC/PI双染试剂盒为例：
1）空白对照组：不进行任何标记的细胞，用于电压的调节，调整前向散射和侧向散射，得到清晰划分的细胞群体。
2）凋亡诱导的单染组：阳性对照的细胞群体需要超过分析的细胞群体的10%，用于调节补偿。
3）双染实验组：利用空白对照组和单染组调节好的参数进行实验数据的获得。